作者：维尔克斯 时间：2025-7-1 11:09:49
LAMBERT荧光寿命成像技术（FLIM）运用了频域调制检测的方法，它能够快速且精确地捕捉到基于荧光寿命差异的图像。这里的“荧光寿命”指的是荧光分子处于激发态的平均持续时间，而这个时间长度会受到分子所处环境、其化学构成以及与其他分子间相互作用等多种因素的影响。其方法如下，用指定参数激光激发样品，然后测量荧光分子返回基态前发射光子的时间。这个时间通常以皮秒到纳秒为单位。通过分析荧光分子在不同状态和不同环境下的时间分布差异，能够的到荧光分子所处环境包含空间分布和环境特性的信息。该技术在研究分子相互作用，细胞内PH变化、离子浓度等方面具有独特的应用。
LAMBERT高速荧光寿命成像系统（Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy）主要由以下几个部分组成：
1.光源：通常采用脉冲激光器，如飞秒激光器或皮秒激光器，提供短脉冲、高强度的激发光，以确保准确地激发荧光样品并测量荧光寿命。
2.光学系统：包括透镜、反射镜、滤光片等光学元件，用于将激发光聚焦到样品上，并收集荧光信号。滤光片用于选择特定波长的激发光和荧光，以提高成像的信噪比和特异性。
3.探测器：常用的探测器有单光子探测器vTAU相机，如光电倍增管（PMT）或雪崩光电二极管（APD），能够检测单个荧光光子并记录其到达的时间信息。
4.数据采集和处理系统：负责控制光源的脉冲发射、探测器的数据采集，并对采集到的数据进行处理和分析，以生成荧光寿命图像。这通常包括电子设备、计算机和相关的软件。
LAMBERT LIFA组件（绿色为vTAU相机）和显微镜架构如下图所示：
|
型号 |
检测模式 |
寿命范围 |
工作模式 |
光源类型 |
典型采集时间 |
|
LIFA |
荧光 |
1-300ns |
频域 |
调制光源 |
<1s |
|
LIFA-P |
磷光 |
300ns-1ms |
频域 |
调制光源 |
<1s |
|
LIFA-X |
双模式 |
1ns-1ms |
频域 |
复合光源 |
<1s |
|
LIFA-TD |
双模式 |
2ns-1ms |
时域 |
脉冲激光 |
100s |
LIFA软件智能分析系统核心特性：
-超高速采集：LIFA软件较传统TCSPC技术软件提升百倍效率，高速荧光寿命成像系统单次测量可在秒级完成。
-智能分析套件：支持实时寿命拟合、多组分分解及FRET效率映射，数据可无缝对接主流分析软件（ImageJ/MATLAB）。
-广谱兼容性：LIFA软件适配各品牌荧光显微镜平台，包括共聚焦、TIRF等高级配置。
-低光毒照明：采用第三代GaAs探测器实现超高量子效率检测。
-先进算法支持：LIFA软件集成相量分析、多频解卷积等算法，实现复杂生物体系中多寿命组分的精准解析。
